从许氏平鲉体表分离海分枝杆菌的鉴定及其脂多糖的抗原性分析

从许氏平鲉粘液、背鳍、鳃等部位分离筛选到同一菌株fz09,经形态学观察、生理生化特性及热激蛋白65(hsp65)基因序列分析,鉴定菌株fz09为海分枝杆菌。分别用酚-氯仿-甲醇法、乙醇-酚水法和传统热酚水法提取菌株fz09的脂多糖(lps),分析了lps的组成和抗原性差异。sds-page结果表明,3种方法提取的lps条带分布基本相同,主要条带分子量分别为14、16和23ku,其中以乙醇-酚水法提取的lps含量和纯度最高,热酚水法提取的lps条带最多,抗原性最好。western-blotting显示,海分枝杆菌抗血清主要与lps的14ku条带发生特异性免疫反应。高碘酸氧化免疫印迹结果表明,仅传统热酚水法提取的lps在14ku分子量区域有弱的阳性条带出现,其他方法提取lps与抗血清的免疫反应呈阴性。高碘酸氧化elisa反应显示,lps经高碘酸氧化后与海分枝杆菌fz09抗血清的反应活性降低,od405明显减弱。