厚壳贻贝m7lysin分子的克隆与表达

m7lysin位于贻贝精子顶体中,是溶解卵黄膜、促进受精作用的重要蛋白质,决定了贻贝种间精卵识别的特异性。采用同源克隆法得到厚壳贻贝m7lysin分子,并在原核生物中对该分子进行重组表达。结果表明,扩增产物为540bp左右的片段,进一步测序发现其开放阅读框cdna为543bp,与贻贝、地中海贻贝、盖勒贻贝具有较高的相似性;在线翻译所得蛋白质片段中含有180个氨基酸,分子量为20ku,等电点为8.48;通过m7lysin氨基酸序列构建系统进化树发现,贻贝和地中海贻贝亲缘关系最近,其次为盖勒贻贝,最后是厚壳贻贝;将m7lysin分子在e.colirosseta(de3)中融合表达,得到包括载体氨基酸序列在内的25ku蛋白质,符合预期分子质量。