合浦珠母贝c-型凝集素基因的序列特征和功能分析

通过est筛选结合重测序法获得合浦珠母贝一种c-型凝集素cdna的全长序列(命名为polec1)。polec1全长988bp,5′-utr为33bp,3′-utr为101bp,开放阅读框为864bp,编码287个氨基酸,分子量为31.68ku,理论等电点约5.83。预测的氨基酸序列中含有信号肽(met1-ser19)和糖结合位点。同源性分析结果表明,polec1与其它物种c-型凝集素的的糖识别结构域序列的同源性在18.8%~28.6%,相似性在28.9%~50.0%之间。进化树分析结果表明,polec1与栉孔扇贝聚为一支。组织表达分析表明,polec1mrna在消化腺、外套膜、性腺、闭壳肌、肠、鳃和血淋巴组织均有表达,在消化腺中的表达分析表明,经溶藻弧菌刺激后2h表达显著下调,而在4和24h后表达显著上调。利用polec1成熟肽构建原核表达载体,在大肠杆菌中进行重组表达。制备包涵体后,用idahisbind树脂纯化得到单一的重组蛋白,凝菌试验表明该蛋白对大肠杆菌有明显的凝集作用。