刺参甘露糖结合凝集素的原核表达、纯化及生物活性分析

为进一步研究刺参甘露糖结合凝集素(aj-mbl)的功能及提高刺参自身免疫力,对aj-mbl基因的cds区进行原核表达、纯化并初步鉴定其生物学活性。采用rt-pcr法扩增aj-mbl基因编码区,经酶切鉴定、序列分析后,将其cds区498bp片段克隆至原核表达载体pet28a中,得到重组质粒pet-aj-mbl。重组质粒转化大肠杆菌bl21(de3)感受态细胞并经iptg诱导表达出分子量约17ku的融合蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,用ni2+离子亲和柱纯化。结果显示,获得高表达量的重组纯化蛋白。纯化的17kuaj-mbl进行红细胞凝集试验检测其生物学活性。凝集试验结果显示,aj-mbl凝集最小浓度为10μg/ml。本实验成功构建了aj-mbl原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达了17kuaj-mbl蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性。