大鲵皮肤cdna文库ests分析及dynll2基因的分离与表达

以本实验室构建的大鲵皮肤cdna文库为材料,通过文库质量检测、随机测序、ests拼接、cog软件进行基因注释等对文库进行了分析,并从中分离获得了大鲵胞质动力蛋白轻链2(dyneinlightchain,lc8-type2,dynll2)基因的cdna序列,对dynll2基因进行了生物信息学分析及组织表达研究。结果表明,本实验室构建的大鲵cdna文库初级库容为1.50×106cfu,文库重组率为94.8%,插入片段平均长度约为1kb。400个随机克隆测序共获得343个有效ests,其中214条ests序列e值＜10-6,经cog软件归为9大类,其中与分泌蛋白、细胞代谢、细胞骨架以及信号转导相关的基因表达量最高,分别为31.3%、14.0%、13.0%和12.6%。表明大鲵皮肤分泌活动强烈,代谢旺盛,这和大鲵皮肤发挥免疫、呼吸以及渗透压平衡等生理功能相一致。获得的大鲵dynll2基因全长为682bp,其中5′-utr为57bp,3′-utr为313bp,生物信息学分析表明,该基因编码104个氨基酸,分子量为12.03ku,等电点pi值为7.05。dynll2蛋白在88~104处有由里向外和由外向里的2个跨膜螺旋区,且二级结构以α—螺旋为主;在69~87处有典型的“znfc2h2”结构模体;经比较,其三级结构与鼠dynll2蛋白相似。dynll2蛋白的进化分析表明,大鲵与无尾两栖类相比,更接近陆生动物。荧光定量实验表明,大鲵dynll2基因在肌肉中高表达,在其他组织中低度表达。