中间球海胆y-box基因分子特性和表达分析

y-box蛋白是从细菌到人类都高度保守的一类蛋白家族,为获得其在中间球海胆的生物学功能,实验克隆了中间球海胆(strongylocentyotusintermedius)y-box基因的全长cdna,并进行了定量表达模式分析。y-box基因全长cdna为2425bp,该序列具有一个81bp的5′非编码区,1348bp3′非编码区,orf为996bp。其cdna编码331个氨基酸的前体蛋白,预测蛋白分子质量为37.4kd,理论等电点是8.55,属于亲水性蛋白。中间球海胆y-box前体蛋白的氨基酸序列包含3个结构域：氨基酸n末端,亲水结构域c末端,冷休克结构域(coldshockdomaincsd),其中csd区为y-box蛋白家族中保守结构域。海胆y-box蛋白质二级结构中无规则卷曲占88.22%,延伸链占9.97%,α–螺旋1.98%,无?–折叠。氨基酸序列与其他物种氨基酸序列的同源性在22.37%～41.26%之间,在保守结构域csd区同源性达到75%以上。构建的系统进化树表明大西洋鲑(salmosalar)、虹鳟鱼(oncorhynchusmykiss)、斑马鱼(daniorerio)、非洲爪蟾蜍(xenopustropicalis)、原鸡(gallusgallus)、小家鼠(musmusculus)、人(homosapiens)、七鳃鳗(lethenteroncamtschaticum)、金鱼(carassiusauratus)聚为一支属于脊椎动物,摇蚊(chironomustentans)、果蝇(drosophilavirilis)聚为一支陆地无脊椎动物,加州海兔(aplysiacalifornica)、栉孔扇贝(chlamysfarreri)、玻璃海鞘(cionaintestinalis)、中间球海胆(strongylocentyotusintermedius)聚为一支,为海洋无脊椎动物。实时定量pcr检测y-box基因在中间球海胆体腔液、管足、围口膜、雄性性腺、雌性性腺、肌肉和肠7个不同组织中均有表达,但是差异不显著。温度胁迫下中间球海胆y-box基因的表达均表现为下调,并且随着温度的升高,y-box基因的表达量呈现逐渐下降的趋势。