石斑鱼虹彩病毒orf050的分子特征和功能初步分析

新加坡石斑鱼虹彩病毒(singaporegrouperiridovirus,sgiv)是导致石斑鱼养殖产业严重经济损失的主要病毒病原之一。sgiv是大分子dna病毒,包含162个基因开放阅读框,其中orf050是一个肿瘤坏死因子受体类似物,可能在sgiv的免疫逃避中发挥作用。本研究克隆了sgivorf050基因,并构建了全长基因的真核表达重组质粒和四个半胱氨酸富集结构域(crd)分别缺失的突变体。rt-pcr和药物抑制实验结果表明,sgivorf050是病毒的一个立即早期基因。亚细胞定位结果表明,该基因在细胞质内均匀地弥散性分布,并在细胞核周围聚集;第一个crd缺失后,基因的定位发生明显的变化,即呈点状分布在胞质中,推测第一个crd对其功能有影响。在过表达sgivorf050的鱼类细胞中观察sgiv感染引起的cpe,发现与对照相比没有明显区别;荧光定量pcr检测sgiv主要衣壳蛋白mcp的转录表达水平,也没有明显变化,提示该基因对sgiv在宿主细胞内的复制增殖可能没有影响。荧光定量pcr检测过表达orf050的细胞在sgiv感染后宿主tnf/tnfr的转录水平,结果显示在感染10h后tnf1、tnf2和tnfr2的表达量升高了2～3倍,而tnfr1的表达量没有明显变化,说明sgiv可能通过orf050来调节细胞tnf和tnfr的表达,从而逃避宿主的免疫攻击。