急性病毒性坏死病毒iap-86基因的克隆、表达及抗凋亡研究

在已经完成的栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒（acuteviralnecrosisvirus，avnv）全基因组序列测序与分析的基础上，设计特异性引物，克隆得到了orf86编码的杆状病毒凋亡抑制蛋白基因（iap-86）。iap-86基因与pet32a（+）质粒连接构建得到重组质粒pet32a-iap86，将重组质粒转化到e.coilbl21（de3）中，使用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷（iptg）诱导蛋白表达，sds-page检测显示表达蛋白分子量约为40ku，经western-blotting和质谱分析证明，该蛋白即为iap-86融合蛋白，co2+柱纯化后得到了纯化的iap-86融合蛋白。将重组的iap-86蛋白用fitc标记，荧光显微镜下观察，发现重组的iap-86蛋白最终能够与栉孔扇贝血淋巴细胞的细胞核和细胞质结合。细胞凋亡检测实验发现，重组的iap-86蛋白能够在一定程度上抑制栉孔扇贝血淋巴细胞凋亡，凋亡抑制率为7%。本实验应用原核表达成功得到了iap-86蛋白，并证明iap-86对栉孔扇贝细胞的凋亡有一定抑制作用，这为进一步研究avnv的侵染机制提供依据。