文蛤生长因子受体结合蛋白2(grb2)基因克隆、时空表达及snp位点筛查

为探索贝类grb2基因的结构、功能特征,以及在贝类生长发育过程中的作用,实验通过已构建的文蛤转录组文库,利用smartrace技术扩增得到了文蛤grb2基因的cdna全长序列,对其生物信息学、组织及发育阶段表达特征进行了分析,并利用直接测序方法在外显子中筛选snp位点。结果显示,grb2基因cdna全长1791bp,开放阅读框669bp,编码223个氨基酸,蛋白由sh-sh2-sh33个结构域组成;氨基酸序列比对发现,文蛤grb2与泥蚶的同源性最高,达到65.6%,与脊椎动物的同源性都在60%以上,说明grb2基因在进化过程中比较保守。荧光实时定量pcr(qrt-pcr)结果表明,grb2在文蛤6个组织和10个发育时期中均有表达,但不同组织间的表达量并没有显著差异;发育时期中的表达量呈现逐渐升高的趋势,在壳顶幼虫时期达到最高,之后表达量又有所降低。snp位点的筛选结果表明,在grb2基因的外显子区域共发现16个snp位点。