热休克及菌胁迫对厚壳贻贝hsp70基因表达的影响

70ku的热激蛋白(hsp70)具有细胞内分子伴侣和细胞外免疫调节功能,是受到热激、重金属、干旱、疾病、寄生虫感染等条件胁迫后产生的诱导蛋白。本实验利用同源克隆法,获得厚壳贻贝hsp70基因1700bp的核心序列,blast比对和系统进化分析显示,该序列与已知的双壳贝类相应分子高度同源,其中与紫贻贝hsp70基因相似性高达96%,在进化树中两者位于同一分支。37℃热激后,厚壳贻贝肝胰腺和鳃中hsp70基因的表达快速上调,2h即达到对照组30倍,随后持续上升,肝胰腺中最高表达量达到对照组100倍,说明厚壳贻贝hsp70分子为典型的热诱导蛋白。鉴于大肠杆菌及枯草芽孢杆菌是水体中常见微生物,进一步利用实时荧光定量pcr技术检测上述两种细菌感染后,hsp70基因在厚壳贻贝鳃和肝胰腺中的表达水平,结果显示,两种细菌均可引起厚壳贻贝鳃和肝胰腺的hsp70基因表达上升,但大肠杆菌诱导效应显著,8h时表达量达到最高,鳃为对照组的4倍,肝胰腺为4.5倍,随后逐渐下降,到48h已恢复到原始水平;枯草芽孢杆菌刺激后,肝胰腺组织中最高表达量在刺激后6h约为对照组2.5倍,与注射pbs的效果相差不大,鳃组织的响应较肝胰腺组织明显,表达量缓慢升高,8h达到最高,为对照组4倍,随后迅速下降,直至生理水平。研究表明,厚壳贻贝hsp70分子在调节环境胁迫及宿主免疫防御中具有重要功能。