海参内脏胶原降解酶的纯化及性质研究

针对海参自溶现象,研究海参内脏中与胶原降解相关蛋白酶的存在情况,以期了解内源性蛋白酶在海参自溶过程中发挥的作用,为解明自溶的内在机理提供理论依据。通过硫酸铵盐析、deae-sepharose阴离子交换柱层析、sephacryls-200凝胶过滤柱层析、phenylsepharoseff疏水柱层析及miniq离子交换柱层析等方法,从海参内脏中分离纯化出降解明胶的蛋白酶。利用荧光底物研究其酶学性质及其对海参体壁胶原蛋白的降解情况。结果表明,该酶最适温度为30℃,最适ph为7.5,可被金属蛋白酶抑制剂edta、egta完全抑制,亦可被pmsf、pefablocsc等丝氨酸蛋白酶抑制剂完全抑制。底物特异性表明,该酶只对金属蛋白酶荧光底物有分解作用,推测其为金属蛋白酶。该酶在4和37℃下均能有效地分解海参体壁胶原蛋白,表明其在海参自溶过程中起重要作用。