沙吸附dna的分布及转化活性

尽管自然环境中存在着大量的dnase,大分子体外dna在土等生态环境中存在并保持转化活性。实验表明dna被沙土吸附之后会被沙土保护而产生对dnase的抗性。然而对沙中dna的检测多是通过pcr或者探针杂交的方法来进行,采用转化方法进行来检测的却鲜有报道。为了研究dna释放进沙之后的分布及转化活性,建立了流过式微型离心沙柱。将20μlpuc18置于1.0g直径介于1.2~2.5mm之间的沙中,1.5ml0.1mol/lcacl2洗脱之后再用200μlten缓冲液提取。结果表明吸附于沙中的dna经提取后仍然具有生物转化活性,并且与洗脱液、提取液具有不同的转化活性和对dnase抗性,说明dna与沙粒的结合不只是一种简单的附着,而是3种复杂的复合体结构。相对于没有沙保护而只能在室温下保留7d转化活性的dna,在被沙吸附保护之后的dna可以保存转化活性达35d以上。研究结果还表明在存在感受态细胞的情况下,生物释放出来的dna并非直接与沙粒结合,而是优先与感受态细胞结合。推测认为沙吸附dna的转化活性同dna的构象及同感受态细胞接触的机会相关,而与dna的浓度不直接相关。这些结果为研究环境中存在的dna库及其与混居的微生物间的作用，水平基因转移及其生态效应提供了有价值的信息。