农杆菌介导佛手遗传转化主要影响因素的研究

采用根癌农杆菌介导的佛手叶盘转化法,在建立转海藻糖合酶基因（tps）佛手体系过程中,对影响农杆菌转化频率的各种因素进行了研究.结果表明,佛手叶盘需在黑暗条件下mt培养基上预培养2-3d,与农杆菌共培养3d较合适;农杆菌菌液浓度od600约为0.6-0.8,感染时间20min;抑制农杆菌生长的抗生素浓度以头孢霉素（cef）250mgl-1和羧苄青霉素（cb）250mgl-1且延迟筛选时间4d最好;共培养基中添加100μmol/l乙酰丁香酮（as）和400mgl-1半胱氨酸（l-cys）对佛手遗传转化有明显的促进作用.经gus报告基因和pcr技术检测,初步证实tps基因已整合到佛手基因组中,且gus报告基因瞬时表达率为5.9%。