叶绿体转化三角褐指藻表达外源蛋白

为建立三角褐指藻(phaeodactylumtricornutum)叶绿体表达体系，从其叶绿体基因组中克隆了rns-trni、trna-rnl序列作为遗传转化同源重组序列，并以氯霉素抗性基因(cat)表达盒作为筛选标记，以及绿色荧光蛋白基因(gfp)表达盒作为报告基因。以ta克隆载体pmd19-t为基础，将cat表达盒以及gfp表达盒连接到rns-trni/trna-rnl两个同源重组片段之间，构建得到含有报告基因gfp表达盒的三角褐指藻叶绿体表达载体，利用电穿孔法将载体导入三角褐指藻叶绿体。对转化藻进行抗性筛选以及报告基因的检测，结果表明，外源基因cat在转化藻中得到表达并提供抗性,报告基因gfp成功地在叶绿体中表达。