氯噻啉酶联免疫分析方法研究

建立了基于多克隆抗体的氯噻啉间接竞争酶联免疫分析(ic-elisa)方法。设计合成了氯噻啉半抗原,将其分别与牛血清蛋白(bsa)和卵清蛋白(ova)偶联制备免疫原和包被原。用免疫原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,抗体效价为2.56×106。通过对有机溶剂含量、离子强度和ph等影响因素的优化,确定了氯噻啉ic-elisa的最佳检测条件(含体积分数10%甲醇的磷酸盐缓冲液、na+浓度为0.14mol/l、ph7.4),并建立了氯噻啉标准竞争曲线,该方法的抑制中浓度(ic50)为0.18mg/l,最低检测限(ic10)为0.0018mg/l。所得多克隆抗体除与吡虫啉有较大的交叉反应外,与其他结构相似的化合物无明显交叉反应。在水、土壤和甘蓝中分别添加0.05~1mg/kg的氯噻啉标准溶液,平均回收率为91.42%~113.82%,相对标准偏差(rsd)为0.72%~8.68%,符合农药残留检测要求。该elisa方法可用于环境及农产品中氯噻啉残留检测。