pseudomonassp.1-7中甲基对硫磷水解酶基因的克隆及酶学性质研究

为了研究和分离有机磷降解酶及其编码基因,从农药厂污水处理池的活性污泥中分离出一株可以高效降解甲基对硫磷的细菌1-7,经16srdna鉴定为假单胞菌pseudomonassp.。通过构建基因组文库的方法克隆了1-7的甲基对硫磷水解酶基因ophc3,该基因全长为975bp,编码324个氨基酸,其中前24个氨基酸残基可能为信号肽序列。将其在大肠杆菌中表达,并对重组甲基对硫磷水解酶(ophc3)进行纯化和酶学性质的研究结果表明,其酶促反应最适ph值为8.0,在ph6.0~10.0的范围内放置30min酶的相对活性均在70%以上;最适反应温度为45℃,但该酶不耐高温,60℃下保温10min,相对活性降至46.77%。