华北大黑鳃金龟holotrichiaoblita中肠羧酸酯酶基因hocl1的克隆与序列分析

利用粉纹夜蛾(trichoplusiani)围食膜蛋白多克隆抗体,从已构建的华北大黑鳃金龟holotrichiaoblita中肠cdna表达文库中筛选得到1个编码羧酸酯酶的cdna克隆hocl1,其开放阅读框(orf)长1599bp,编码532个氨基酸,推导的蛋白质分子质量为59.5kda,等电点(pi)为4.5。hocl1蛋白具有羧酸酯酶的保守结构域:1个二硫键形成的位点和1个丝氨酸活性中心,三联体催化活性中心位于ser207、asp333和his422上,不含有氮联糖基化位点和氧联糖基化位点,只含有3个半胱氨酸残基。依据氨基酸序列同源性分析和保守结构域分析,hocl1属于b类酯酶,与赤拟谷盗triboliumcastaneum羧酸酯酶相似性最高,为35.2%。通过与其他昆虫羧酸酯酶序列比对及构建系统发育树,发现hocl1羧基端的氨基酸序列保守性低,但靠近n端的活性中心处的氨基酸序列则高度保守,可与赤拟谷盗、异色瓢虫harmoniaaxyridis羧酸酯酶聚类在一起。羧酸酯酶hocl1基因的克隆鉴定为进一步研究该基因在华北大黑鳃金龟体内的表达及功能奠定了基础。