黑曲霉耐酸性α-半乳糖苷酶的分离及其酶学性质

？采用耐酸性黑曲霉(aspergillusnigerl.)发酵豆渣产α-半乳糖苷酶，粗酶液依次经过聚乙二醇6000-kh2po4双水相萃取、sephadexg-100凝胶过滤，获得了电泳纯的α-半乳糖苷酶，纯化倍数为36.4，总酶活力回收率达到70%。凝胶过滤表明：该酶表观分子质量为125kd，sds-page显示其分子质量为58.5kd。该酶水解对硝基苯-α-d-吡喃半乳糖苷的最适ph值为4.0，最适温度为65℃，表观km值为0.915mmol/l，表观kcat/km值为1.07×105l/(mol·s)；水解蜜二糖的表观km、kcat/km值分别是21.0mmol/l、9.96×103l/(mol·s)；对棉子糖只有微弱的水解作用。水解活性受多种金属离子的普遍抑制，其中fe3+、fe2+、mn2+、hg+等强烈抑制酶活力。该酶活力在ph1.5～8.2保持稳定，在60℃时保温60min，剩余酶活力达到了60%，是一种热稳定酸性α-半乳糖苷酶。