耐高温β-半乳糖苷酶的分离纯化与酶学性质分析

？为从嗜热脂肪芽孢杆菌(bacillusstearothermophilus)xg24发酵液中纯化到β-半乳糖苷酶，并对酶学性质进行研究，利用硫酸铵分级盐析、deae-sepharosefastflow阴离子交换层析和sephadexg-75分子筛凝胶过滤层析等方法进行分离纯化。结果表明：经过系列步骤纯化后，酶纯度提高了54.5倍，回收率20.4%，酶比活力达32.7u/mg。以邻-硝基酚-d-半乳糖吡喃糖苷(onpg)为底物，研究β-半乳糖苷酶的酶学性质。最适ph6.5，最适作用温度65℃。此菌株产β-半乳糖苷酶在70℃以下和ph4.0～8.0范围内具有较好的稳定性；mg2+、mn2+、fe2+和co2+对此酶有明显激活作用，而cu2+、ag+、hg2+几乎完全抑制酶活性。以onpg为底物酶的km值为4.32mmol/l。sds-page和凝胶过滤层析测得酶蛋白为单肽链蛋白，表观分子质量64kd。因此，嗜热脂肪芽孢杆菌xg24β-半乳糖苷酶在乳制品工业中具有潜在的应用价值。