实时rt-pcr检测存活于乳中的单核细胞增多性李斯特菌

？单增李斯特菌是一种可在低温下生长、能引起人畜共患病的食源性致病菌。为克服传统pcr检测的假阳性问题,有效的检测单增李斯特活菌,本研究提取单增李斯特菌的总rna并进行反转录,以单增李斯特菌的必要毒力基因hlya为靶基因,设计特异性引物和taqman探针进行实时pcr检测,研究了检测的特异性和灵敏度,考查了对人工污染牛乳进行检测的应用性。结果表明,所用引物和探针能较好的扩增目的基因,而对其他食源性致病菌无交叉反应。单增李斯特菌经1h增菌,可检出3×102cfu/ml。而经3h增菌,活菌检测限可达30cfu/ml。人工污染牛乳样品经6h增菌,检测限为17cfu/ml。此方法可应用于乳中单增李斯特菌的快速检测和污染状况调查。