抗羟基红花黄色素A抗血清的制备

目的：通过人工抗原的构建，制备抗羟基红花黄色素A(HSYA)的特异性抗血清。方法：采用直接合成法将HSYA 与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)的共价偶联，分别合成免疫抗原HSYA-BSA 和包被抗原HSYAOVA，并进行相关鉴定；用合成的人工抗原免疫家兔，制得抗羟基红花黄色素A 的特异性抗血清，采用酶联免 疫法鉴定。结果：根据建立的标准曲线方程计算得HSYA 和BSA 的结合比是50:1，HSYA 和OVA 的结合比是112.8:1；理想的包被抗原的浓度为4μg/ml，抗血清和二抗的工作浓度分别为1:200 和1:2000；交叉反应实验表明，该抗体与芦丁、金合欢素的反应率均接近于零；亲和性实验结果表明，在0.25～2μg/ml 浓度范围内，抑制率与浓度呈线性关系，线性回归方程为y= － 16.213lgx+102.47(r=0.9575)，抑制中浓度IC50 为1.5μg/ml，最低检测限为0.250μg/ml。结论：通过直接偶联法可以成功制备出具有抗羟基红花黄色素A 的特异性抗血清