酪蛋白水解物的类蛋白反应修饰及其产物ace抑制活性特征

？采用碱性蛋白酶水解酪蛋白，制备水解度为10.9%、ic50值为52.6μg/ml的酪蛋白水解物，并利用响应面法优化碱性蛋白酶催化的类蛋白反应修饰条件。修饰反应时间固定为6h时，适宜的条件为酶添加量3.1ku/gpro、底物质量浓度50g/100ml、反应温度25℃。制备9个修饰程度不同的修饰产物，结果显示：修饰产物ace抑制活性均提高，并且活性最高的修饰产物的ic50降低至14.9μg/ml。该修饰产物离心分级后，上清液部分和沉淀部分的ace抑制活性分别低于和高于修饰产物，表明沉淀部分是提高ace抑制活性的主要原因；tricine-sds-page电泳分析表明，修饰产物及沉淀部分有较大分子质量的肽分子生成；该修饰产物和上清液部分、沉淀部分的进一步酶水解处理则显示，酶水解会导致它们的ace抑制活性降低，但是仍然高于最初的酪蛋白水解物。