高效液相色谱法测定母乳中唾液酸含量

？建立荧光高效液相色谱(fluorescencedetector-highperformanceliquidchromatography，hplc-fld)测定母乳中唾液酸n-乙酰神经氨酸(n-acetylneuraminicacid，neu5ac)和n-羟乙酰神经氨酸(n-glycolylneuraminicacid，neu5gc)含量的分析方法。利用酸水解法释放出母乳中的唾液酸，以4,5-亚甲二氧基-1,2-邻苯二胺盐(4,5-methylenedioxy-1,2-phenylenediaminedihydrochloride，dmb)为衍生化试剂，50℃避光衍生150min，采用荧光高效液相色谱仪检测。色谱条件：lichrosorbrp-18柱(250mm×4mm，5μm)，流动相为甲醇-乙腈-超纯水(7:8:85)，流速0.9ml/min，进样体积10μl，柱温30℃，荧光检测器激发波长373nm，发射波长448nm。结果表明：唾液酸在50～400μmol/l范围内与唾液酸峰面积的线性关系良好，平均回收率为94.0%，精密度的相对标准偏差(relativestandarddeviation，rsd)为0.4%，稳定性rsd为1.0%，重复性rsd为0.8%，neu5ac的最低检出限为0.02μmol/l，neu5gc的最低检出限位0.03μmol/l。该方法简单、重复性好、灵敏度高，可广泛用于奶粉、牛奶及母乳中唾液酸含量测定。