橙汁腐败酵母菌的分子鉴定及其形态特征分析

？目的：结合多种酵母菌鉴定方法，分析腐败橙汁中酵母菌的种类，为快速检测和控制商品橙汁中酵母菌污染奠定基础，也为酵母菌种类的快速鉴定提供参考。方法：以分离自腐败橙汁的8株酵母菌株为材料，观察菌落和细胞形态。用引物its1/its4扩增菌株5.8srdna及其its间隔区(5.8s-its)，对扩增产物用hhaⅰ、haeⅲ和hinfⅰ进行限制性酶切片段多态性(rflp)分析和测序；用引物nl1/nl4扩增26srdnad1/d2区并测序。结果：菌落特征观察将菌株初分为6组，细胞学观察粗分为3组，分子方法都分成4组。用限制性内切酶hhaⅰ、haeⅲ和hinfⅰ对5.8s-its区产物进行rflp分析，观察到4种不同的图谱类型。5.8s-its区和26srdnad1/d2区的序列分析结果相似，8株分离菌与genbank中的4种酵母菌参考菌株序列一致性达99%以上。分离株与参考菌株以两区序列构建的nj系统树都分成4枝：y1与克鲁维毕赤酵母(pichiakluyveri)，y12-3、y18-1与发酵毕赤酵母(pichiafermentans)，y22、y23、y26和y56与meyerozymaguilliermondii，y47与wickerhamomycesanomalus分别聚为一枝。结论：结合形态分析和核酸分析，将8株腐败橙汁分离菌鉴定为p.kluyverivar.kluyveri、p.fermentans、m.guilliermondii和w.anomalus4个种，其中m.guilliermondii在腐败橙汁中首见报道；its-rflp分析、26srdnad1/d2区测序与菌株形态特征结合能有效鉴定酵母菌，核糖体dna分析可鉴定酵母到生物学种，菌落形态特征可反映种以下的遗传差异，因此，采用分子方法鉴定时不能忽视形态特征分析的重要性。