重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶的纯化和性质

目的：探讨重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)的分离纯化过程及其性质。方法：摇瓶发酵得到的粗酶液经Q-Sepharose Fast Flow层析纯化，用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)确定其分子质量，用紫外和荧光分光光度计研究其光谱特征。结果：获得GOD的纯品，酶的纯化倍数为1.35倍，酶活回收率为92.7%，天然分子质量为150kD，亚基分子质量为75kD；酶活力在pH5.0～8.0和55℃以下稳定，最适pH值为6.0，最适温度为40℃；以葡萄糖为底物的酶学动力学常数Km值为21.06mmol/L；Hg2+、Ag+、Cu2+、Fe2+对其有强烈的抑制作用；该酶在275nm波长处有最大紫外光吸收，在344nm波长处有最大荧光吸收峰；液体状态下该酶在4℃条件下放置6个月活性没有损失，常温下可保存3～5d。结论：重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶纯化成本低，收率高，有利于大规模纯化，得到的纯品稳定性好，具有较高的利用价值