抗克伦特罗单链抗体可溶性表达及特性鉴定

？目的:表达抗克伦特罗(cbl)可溶性单链抗体(scfv)并进行抗原结合活性鉴定。方法:利用呈现scfv的重组噬菌体感染大肠杆菌hb2151,iptg诱导可溶性scfv表达。渗透休克法提取菌体细胞周质腔中scfv。经sds-page、western-blotting以及间接elisa法分析检测可溶性scfv的表达,并采用间接竞争elisa法鉴定scfv的抗原结合活性。结果:细菌培养上清及周质腔中均有抗cbl可溶性scfv表达,其分子量约为29kd;上清液及周质腔中scfv效价分别为1:80,1:1600,能够被cbl竞争性抑制,ic50分别为0.78、0.95ng/ml。结论:可溶性抗cblscfv在大肠杆菌hb2151中获得成功表达,表达的scfv与cbl具有很好的结合活性,可用于进一步建立cbl相应的免疫学检测方法。