大豆锰超氧化物歧化酶基因在乳酸乳球菌中的分泌表达

为使大豆锰超氧化物歧化酶（Mn superoxide dismutase，MnSOD）在乳酸乳球菌中高效表达，将克隆的MnSOD基因开放阅读框序列分别重组到质粒pNZ8149和经改造的质粒pNZS上，表达载体pNZ-SOD和分泌表达载体pNZS-SOD，将两者分别以电穿孔法转化乳酸乳球菌L. lactis NZ3900，经Elliker琼脂板筛选、聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）、酶切鉴定正确后，获得的两重组菌株加入Nisin进行诱导表达，对L. lactisNZ3900/pNZ-SOD和L. lactis NZ3900/pNZS-SOD的表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodiumdodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）和酶活性对比分析。结果显示：L. lactis NZ3900/pNZS-SOD菌株表达SOD总活性约是L. lactis NZ3900/pNZ-SOD菌株的1.6 倍，是L. lactis NZ3900/pNZ8149的13.5倍，且可将表达的约2/3的SOD分泌到胞外，表明经改造的乳酸菌分泌表达系统L. lactis NZ3900/pNZS能够分泌表达SOD，并增强SOD的表达