一种高温细菌葡聚糖磷酸化酶的性质研究（Ⅱ）

为认识和应用极端嗜热细菌腾冲嗜热厌氧杆菌(T. tengcongensis MB4T)产生的葡聚糖磷酸化酶(Tte-GlgP)的性质，用电喷雾质谱法(ESI-MS)测定Tte-GlgP 的底物谱。结果表明：纯化后的Tte-GlgP 有较广的底物范围，能将可溶性淀粉、麦芽糊精、糖原、麦芽七糖、麦芽五糖和麦芽三糖底物转化为1- 磷酸葡萄糖(G-1-P)。用改进后的双酶法测定Tte-GlgP 对上述底物的转化效率，以产生的G-1-P 的量为指标(μmol/L)，在相同的实验条件下，以麦芽七糖和麦芽五糖为底物时，转化效率相对高，分别为86.83μmol/L 和85.79μmol/L；糊精和可溶性淀粉次之，分别为82.9μmol/L G-1-P 和69.68μmol/L G-1-P；最低的分别为糖原和麦芽三糖，产生的G-1-P 分别为45.81μmol/L 和43.60μmol/L。两种分析方法均证明麦芽寡糖、麦芽糖糊精和淀粉为Tte-GlgP 的最适底物。以上述双酶法为酶活性测定方法，测得在体系pH8.0 时，Tte-GlgP 的活性最高；在最适pH 值条件下以可溶性淀粉为底物时Tte-GlgP 催化反应的最适温度为60℃；在60℃保温6h 后，Tte-GlgP 仍然有90% 的活性残留，说明Tte-GlgP 具有热稳定性