噬菌体基因ⅴ蛋白基因的合成、重组表达及功能分析

？目的：研究丝状噬菌体基因v蛋白(genevprotein，gvp)基因的合成、重组表达及其功能。方法：根据gvp的基因序列，选择大肠杆菌偏爱的密码子，设计合成了8个寡核苷酸片段，利用重叠延伸pcr合成gvp基因序列，将其与原核表达载体pet-28a-c(＋)质粒重组，转化大肠杆菌，获得gvp蛋白阳性表达菌株，异丙基-β-d-硫代吡喃半乳糖苷(iptg)诱导表达，产物经ni+-nta琼脂糖凝胶层析纯化，获得目的蛋白gvp，dna结合实验检测其功能。结果：成功合成出gvp基因，重组体在大肠杆菌bl21(de3)中诱导获得高效表达，dna结合实验表明gvp与单链dna间解离平衡常数kd=7.27×10-5mol/l。结论：重组构建并高效表达的gvp蛋白具有较高单链dna结合能力，可用于食品病原微生物特定单链dna分子的浓缩和分离。