巴西松子中蛋白酶的分离纯化及酶学性质

在单因素试验基础上，通过正交试验研究pH值、提取时间和料液比3个因素对巴西松子中蛋白酶活力的影响，得出巴西松子中蛋白酶的最佳提取缓冲液为pH9.0的硼酸-硼砂缓冲液、提取时间为60min、料液比为1:8(m/V)；采用(NH4)2SO4沉淀、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析分离纯化巴西松子中的一种蛋白酶，结果表明：纯化后蛋白酶比活力提高到了8.61倍，回收率为21.65%。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明：该蛋白酶分子质量为33kD。酶学性质结果表明：该蛋白酶最适pH值为9.0，属碱性蛋白酶；反应的最适温度为50℃；金属离子Mn2+对该蛋白酶活性有强烈的激活作用，而Ca2+、Mg2+和Cu2+对酶活性有抑制作用