猪肝乙醇脱氢酶的分离纯化及部分性质

新鲜猪肝经匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析及Superdex-200凝胶过滤层析，获得电泳纯的乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase，ADH）。纯化结果显示：该酶比活力为1 622.33 U/mg，回收率为29.05%，纯化倍数为34.58；该酶分子质量约为171.79 kD，亚基分子质量约为43.68 kD。ADH酶学性质研究显示：最适反应温度和pH值分别为45 ℃和10.0；在25～45 ℃及pH 7.5～9.0范围内稳定性较好；最适条件下测得该酶对乙醇的Km值为19 mmol/L；正丁醇、氯仿、异丙醇、十二烷基硫酸钠、草酸、Zn2＋、Cu2＋、Ag＋对该酶的抑制作用最强，Mg2＋对该酶有激活作用，EDTA对该酶有双重作用