孔雀石绿单克隆抗体的制备及直接竞争ELISA方法的建立

通过合成羧基化孔雀石绿，采用活泼酯法制备孔雀石绿免疫抗原CMG-BSA、检测抗原CMG-OVA。采用CMG-BSA 免疫 BALB/c 小鼠，经融合、筛选和克隆化获得了一株稳定的抗孔雀石绿单克隆抗体，并建立了检测孔雀石绿的直接竞争ELISA 方法。ELISA 方法的最佳操作参数：孔雀石绿抗体稀释倍数1:16000(1mg/ml)，酶标抗原(CMG-HRP)使用质量浓度0.2μg/ml。该方法具有良好的灵敏度和特异性，IC50 值0.3ng/ml，最低检测灵敏度达到0.05ng/ml，标准曲线方程为y ＝－ 20.888x ＋ 81.423(R2 ＝ 0.9813)