糖皮质激素ELISA 检测方法的建立及群选性抗体的筛选

设计间接竞争ELISA 方法，并优化二抗稀释比、竞争时间、PBS 溶液的pH 值3 个条件参数。优化后的地塞米松、倍他米松、双氟米松3 种抗体的间接竞争ELISA 曲线的IC50 分别为2.66、7.36、6.12ng/ml。通过3 种抗体的交叉反应来评估其群选特性。结果表明，地塞米松抗体的群选性最强，对双氟米松的交叉反应率高达120%、倍他米松73%、曲安息龙37%、泼尼松龙21%，而对其他3 种内源性类糖皮质激素交叉反应率均小于0.1%，然后地塞米松以0.375、0.75、1.5、3.0ng/g 分别添加到鸡肉样本中测定回收率，所得回收率在61.3%～80.3% 之间，变异系数小于15%。在实际样本检测中，将ELISA 方法的测定结果与LC-MS 的结果进行比较，两者具有很好的相关性