南美白对虾中四种病原菌的多重pcr检测

？根据沙门氏菌的侵染上皮细胞表面蛋白基因(inva)、单增李斯特菌的侵入关联蛋白基因(iap)、金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)和副溶血性弧菌的耐热直接溶血素基因(tdh)分别设计4对特异性引物，并以细菌16srrna基因的部分保守序列为内标，通过对退火温度、引物浓度等反应参数的调整和优化，建立的多重pcr方法为10×pcrbuffer2.0μl(含mg2+)、dntp200μmol/l、dna模板1μl、taqdna聚合酶2.5u，引物浓度分别为16srrna200nmol/l、tdh250nmol/l、nuc300nmol/l、iap350nmol/l、inva250nmol/l，加无菌水至总体积为20μl；反应条件：94℃预变性4min、94℃变性30s、57℃退火40s、72℃延伸1min、72℃延伸10min，反应共进行30个循环。为检验该方法的可行性，进一步对人工接种上述4种病原菌的南美白对虾进行多重pcr检测。结果表明：对污染样品直接提取dna和预增菌后提取dna再进行多重pcr检测，均能有效扩增出各个目的片段；但预增菌处理后可使检测限明显降低，进而大大提高检测的灵敏度。本多重pcr方法可作为食品包括水产品中病原微生物的快速、灵敏和高效的检测方法。