基于dna染料ema的rt-pcr技术定量检测海产品中病原性副溶血弧菌活细胞

？将一种dna染料叠氮溴化乙锭(ethidiumbromidemonoazide，ema)与实时定量聚合酶链式反应(rt-pcr)技术相结合，建立一种能选择性定量检测牡蛎中trh阳性副溶血弧菌活细胞的新方法。结果表明：使ema成功插入死细胞dna并且光解溶液中游离ema的最佳曝光时间为20min；不抑制副溶血弧菌活细胞dna扩增的最大ema质量浓度为2.0μg/ml；完全抑制热致死细胞dna扩增的最小ema质量浓度为1.0μg/ml；人工污染牡蛎样品，不经过富集，在2.0×103～2.0×107cfu范围内细胞数的常用对数值与ct值之间呈严格的负相关性，并且纯培养与人工污染牡蛎样品的rt-pcr检测限均为2×103cfu，即人工污染牡蛎样品的rt-pcr检测灵敏度为每克牡蛎样品400个活细胞；冻融实验表明，在温度低于55℃的水浴中对冷冻海产品进行解冻时，冻融过程对副溶血弧菌活细胞几乎没有影响。该方法是一种快速、灵敏且能有效鉴别并定量检测病原活细胞的新方法。