韭菜酸性磷酸酶的分离纯化及酶学性质

取新鲜韭菜，通过匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析等方法纯化，获得韭菜中所含的一种电泳纯的酸性磷酸酶(ACP)。经纯化后的酶溶液比活力为645.83U/mg，纯化倍数达到454.81倍，回收率为10.50%。酶学性质研究表明：该酶的分子质量约为58.97kD；最适反应温度和pH值分别为65℃和5.4；该酶对对硝基苯磷酸二钠(pNPP)的Km值为0.896×10-3mol/L；较高浓度的Mg2+、Mn2+对该酶的激活作用更强；抗坏血酸、甲醇、乙醇、氯仿、异丙醇、Cu2+、Ag+的浓度越大，对该酶的抑制作用越强