重组n-乙酰鸟氨酸脱酰基酶的表达条件优化

？n-乙酰鸟氨酸脱酰基酶(n-acetylornithinedeacetylase,naoase)为新型氨基酸拆分酶,可在重组菌bl21(de3)-pet22b-arge中胞内诱导表达。为降低生产成本并提高酶活,优化了培养基成分及诱导条件。结果表明,进口的蛋白胨和酵母膏明显优于国产原料。5.0g/l的乳糖可以代替昂贵的iptg(isopropy1β-d-1-thiogalactopyranoside,异丙基β-d硫代半乳糖苷)起到有效的诱导效果。最佳碳源为1.0g/l甘油,氮源为15.0ml/l玉米浆和5.0g/l蛋白胨。naoase大多以不可溶的包涵体形式表达,少量为可溶的活性表达。降低诱导温度可增大活性表达的比例,而整菌表达量也随之降低。22℃诱导10h为活性表达的最适条件,生物量为6.91,酶活为392.65u/ml,分别为优化前的1.65倍和5.72倍。