重组花生过敏原Ara h 2生物合成

为获得重组花生过敏原Ara h 2。通过RT-PCR 合成cDNA，并以此为模板进行PCR 扩增目的基因Ara h 2，扩增产物经纯化后克隆至pMD19-T Simple 载体中，构建重组质粒pMD19-T-Ara h 2。上述重组质粒经酶切纯化后定向克隆到pGEX-4T-1 表达载体中，构建原核表达载体pGEX-4T-1-Ara h 2，并转化表达宿主菌BL21-codonPlus(DE3)-RIPL 中，经IPTG 诱导表达。SDS-PAGE 电泳结果表明，该表达蛋白大小约为46kD，与理论值相符。通过Glutathione Sepharose 4B 凝胶亲和层析方法纯化融合蛋白GST-Ara h 2，获得融合蛋白纯度约为90%。Western blotting 分析表明，经纯化的融合蛋白能与抗Ara h 2 兔血清发生特异性反应，说明该蛋白具有良好的免疫原性