利用低温聚合酶链式反应技术提高大豆超氧化物歧化酶活性

目的：利用低温聚合酶链式反应对大豆超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的活性进行改良。方法：将6 种在较低退火温度下扩增出的超氧化物歧化酶基因插入到表达载体pREP5N上，构建pPM1、pPM2、pPM3、pPM4、pPM5、pPM6表达载体，转入大肠杆菌后得到工程菌，诱导其在大肠杆菌中进行蛋白表达，并进行酶活力测定，筛选高酶活力菌株。结果：将已克隆的目的基因序列与已知的大豆MnSOD基因序列比对分析，一致性平均为86.57%，氨基酸序列同源性平均为82.58%。对已获得的6 种工程菌进行蛋白质提取，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示表达产物的分子质量约为26 kD。经1%差异水平分析，改良后的SOD酶活力均有极显著提高，平均比对照菌株的酶活力提高1.95 倍。结论：本实验证明低温聚合酶链式反应是改变酶活性的一种有效方法，为超氧化物歧化酶在生产中的应用提供了技术支持