磷酸三酯酶突变体H23A的真核表达及性质表征

通过同源序列比对和晶体结构分析，嗜热菌Geobacillus kaustophilus HTA426磷酸三酯酶的H23位点高度保守，并且位于金属离子结合位点附近。结合Rosseta design程序设计，本实验将突变体H23A在毕赤酵母GS115中高效表达。通过组氨酸标签镍柱分离纯化、非变性蛋白电泳和Western blotting鉴定表达产物，证明该突变体酶主要是以介于单体和二聚体之间的寡聚形式存在。初步酶学性质研究表明，突变体酶是别构酶，Vmax为92.45U/mg，Hill系数h为1.98；最适温度为70℃，最适pH值为10.0；70℃的热稳定性良好，半衰期为5.1h，而且大多数二价金属离子对突变体H23A都有激活作用