双重PCR-DHPLC技术快速检测水产品中金黄色葡萄球菌

根据编码金黄色葡萄球菌肠毒素A的sea基因、编码耐热核酸酶的nuc基因为目的基因，设计两对特异性引物，利用聚合酶链式反应结合变性高效液相色谱技术，建立水产品中金黄色葡萄球菌的双重PCR-DHPLC检测方法。以30株参考菌株进行特异性实验，除所试8株金葡菌出现目的片段和阳性吸收峰外，其余菌株均未检测到目的片段与阳性吸收峰，表明该方法具有良好的特异性。灵敏性实验结果表明，检测灵敏度达到菌液浓度50CFU/mL，比普通的凝胶电泳高一个数量级。利用建立的双重PCR-DHPLC检测方法对240份水产品进行检测，共检出22株金黄色葡萄球菌，检出率为9.2%，其中含有肠毒素基因有8株，占总样本的3.3%，与国标法检出阳性率比较无显著差异，证明该方法具有良好的实用性。实验证明，本研究建立的双重PCR-DHPLC方法不仅可以特异、灵敏、简便快速且高通量的实现对水产品中金葡菌的检测，而且也可通过对肠毒素基因的分析，方便地判断出该菌株致病性的强弱