大熊猫冷冻精液解冻速度和解冻液中添加pentyoxyfilline对其解冻后活力的影响

？建立大熊猫的精子库,进行远距离圈养大熊猫种群间的人工授精和遗传物质的转运,维持遗传多样性,是目前大熊猫遗传管理的优先方法。要成为最有效的工具,精子库保存的精子解冻后的活力必须很好。本文对大熊猫冷冻精液的解冻速度和解冻液中添加化学激活剂pentyoxyfilline(pf)后的精子活力进行了试验。试验用的精液采自11只成年大熊猫,精液冷冻速度为每分钟-40℃～-100℃。试验ⅰ:将冷冻精液放入3种不同温度的水浴中解冻:(1)22℃(慢速解冻);(2)37℃(中速解冻)(3)50℃(快速解冻)。将冷冻前精子活力(78.1±2.9%)和解冻后的平均精子活力进行比较,快速解冻后的精子活力(57.5±5.4%)显著地降低(p<0105),而中速解冻的精子活力(67.5±3.1%)和慢速解冻的精子活力(73.33±2.1%)与冷冻前的活力接近。试验ⅱ:使用中速解冻方法解冻精液后,分别加入最终浓度为0mm、1mm、5mm和10mm的pf,然后分别保温15min和24h。在pf(0mm、1mm、5mm和10mm)中分别孵育15min的解冻精子活力,运动状态,活率和顶体正常率在试验期的90min内都很相似(p>0105)。在1mmpf中孵育24h的精子活力没有变化(p>0105)。在5mm和10mmpf中孵育过的精子活力(5mm:24.0±4.7%;10mm19.5±3.6%)比没有加pf的对照组的精子活力(38.3±5.2%)显著地低(p<0.05)。而且,在10mmpf孵育4h的精子的顶体正常率(56.3±2.8%)也比对照组的顶体正常率低(71.0±3.3%,p<0.05)。结果表明大熊猫精液通过快速冷冻制成的颗粒冻精用慢速解冻的效果更好。虽然,大熊猫精子对常用激活剂pf是敏感的,但激活时间短暂,几小时后反而会降低精子的活力,在高浓度下还会损坏精子的顶体。