梅花鹿s100a4基因的克隆及融合蛋白的表达

？为了研究梅花鹿s100a4(s100calciumbindingproteina4)基因在鹿茸生长过程中的作用。用rt-pcr法从生茸骨膜细胞总rna中克隆了梅花鹿s100a4基因,在ncbi中对基因序列进行比对;将完整的基因序列与逆转录病毒表达载体plegfp-c1重组,获得了重组质粒plegfp-s100;用脂质体法将plegfp-s100与pvsv-g(被膜载体)共转染包装细胞gp2-293,获得重组病毒上清液,感染角柄骨膜细胞后逆转录病毒携带的基因进入宿主细胞。结果显示:s100a4基因是一个相对保守的基因,与多个物种的匹配度达到90%;重组逆转录病毒载体plegfp-s100可以形成重组逆转录病毒粒子,将s100a4基因导入靶细胞,并表达s100a4与gfp(greenfluorescentprotein)的融合蛋白。