海南坡鹿cdc42cdna的克隆、原核表达及纯化

？应用rt-pcr方法对海南坡鹿细胞分裂周期蛋白42(celldivisioncycle42,cdc42)编码区进行扩增,将扩增产物与pet-42a载体连接,重组质粒鉴定正确后,进行生物信息学分析;构建pet42a-hdcdc42表达载体,经iptg诱导表达,将表达产物进行sds-page、可溶性分析、纯化及westernblot分析。结果表明,海南坡鹿cdc42含有1个576bp的开放阅读框,编码191个氨基酸。经iptg诱导表达后,得到一个带有his-tag和gst的约54kd的融合蛋白,用抗his单克隆抗体进行westernblot,得到一条约54kd的特异性抗体结合带,表明海南坡鹿cdc42原核表达载体成功构建并表达。