犬瘟热病毒小熊猫株反向遗传系统的构建及其鉴定

？以驯化致弱的犬瘟热病毒小熊猫株(caninedistempervirus,cdv)为模板,构建犬瘟热病毒感染性cdna克隆。对其全基因组序列测定后,用rt-pcr的方法获得组成全长基因的7个片段,通过酶切、拼接将7段cdvcdna序列插入到真核表达载体pci的mcs上,构建犬瘟热病毒小熊猫株的全长cdna质粒(pci-cdv-lp),同时分别克隆cdv小熊猫株n、p、l蛋白orf构建三个辅助质粒。酶切鉴定和序列测定表明,pci载体中插入的核酶及cdvcdna序列正确无误,使用转染试剂lipofectaminetm2000将全长质粒和三个辅助质粒共转染中国仓鼠肾细胞(bsr),经rt-pcr、间接免疫荧光和病毒感染vero-slam细胞试验鉴定,成功拯救出cdv小熊猫株,显示cdv小熊猫株反向遗传系统构建完成,为犬瘟热病毒致病机理及免疫研究奠定基础。