大熊猫和亚洲黑熊tnnc1基因的克隆、表达与序列分析

？慢肌肌钙蛋白c(troponinctype1,tnnc1)具有高度保守性,调控骨骼肌慢肌和心肌的收缩,影响肌蛋白的生成,从而可能导致动物肌肉的生长、进化和功能的差异。本研究以大熊猫和亚洲黑熊骨骼肌为材料,提取总rna和基因组dna,运用rt-pcr和touch-downpcr分别扩增出tnnc1基因的cdna序列和结构基因序列,并且构建了含有tnnc1cdna的重组表达载体,转化进入e.colibl21进行超表达研究。结果表明大熊猫tnnc1基因的cdna片段长602bp,包含一个编码161个氨基酸的开放阅读框,其结构基因全长2831bp,包含6个外显子和5个内含子。亚洲黑熊tnnc1基因的cdna片段长486bp,亦包含一个编码161个氨基酸的开放阅读框,其结构基因全长2758bp,同样包含6个外显子和5个内含子。该两个物种的tnnc1基因与已报道的13种动物的tnnc1基因具有很高的相似性。拓扑预测表明,大熊猫和亚洲黑熊tnnc1蛋白有1个蛋白激酶c磷酸化位点,5个酪蛋白激酶ⅱ磷酸化位点,1个n-豆蔻酰化位点,3个ef手性钙结合域及1个n-糖基化位点。将tnnc1基因在大肠杆菌中表达发现tnnc1蛋白与氮端多聚组氨酸标签蛋白(his6)融合成大小为23.5kd左右的多肽,这与预期结果相一致。本研究结果为进一步深入探讨大熊猫和亚洲黑熊tnnc1基因及蛋白的结构、功能和进化关系提供资料。