虎源流感病毒ha基因的系统发生分析及其在杆状病毒系统中的表达

？通过对虎源流感病毒a/tiger/harbin/01/2003(h5n1)的ha基因进行克隆与序列测定,证明该基因全长为1731bp,读码框由1707个碱基组成,编码568个氨基酸。对ha基因的进化分析表明,该基因与h5亚型流感病毒的ha基因同源性最高,其ha裂解位点由6个碱性氨基酸插入序列(rrrkkr)组成,符合高致病性禽流感病毒的分子特征。将ha基因克隆入杆状病毒转座载体质粒pfastbacⅰ,构建重组质粒pfastbac-ha;再将该重组质粒转化dh10bac感受态细菌,在体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒bacmid-ha;将bacmid-ha转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。经western-blotting检测,ha蛋白在重组杆状病毒中获得表达。用感染重组病毒的sf9细胞免疫小鼠,2次免疫后2周可诱导小鼠产生1∶8～1∶16的血凝抑制抗体,表明虎源流感病毒的ha基因在重组杆状病毒系统中得到了正确表达。