高原鼠兔低氧诱导因子-1α蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

？高原鼠兔生活在青藏高原海拔3000～5000m的区域,具有极强的低温、低氧耐受能力。低氧诱导因子-1(hif-1)是一种由hif-1α和hif-1β组成的异源二聚体转录因子,在生物体的低氧适应性调节中起着关键作用。低氧主要通过调节hif-1α蛋白水平来影响hif-1α的转录活性。本研究用dna重组技术将高原鼠兔hif-1α(phif-1α)(538/822)编码基因序列亚克隆至原核表达载体pgex-4t-1中,并在大肠杆菌bl21菌株中进行高效诱导表达,获得可溶性表达产物。将纯化后的gst-phif-1α(538/822)融合蛋白作为免疫原免疫家兔制备多克隆抗体。免疫印迹结果表明,制备的抗体能够识别高原鼠兔hif-1α蛋白。进一步利用亲和纯化的方法对此多克隆抗体进行了纯化。免疫印迹和免疫染色的结果表明,纯化的抗体可以用于检测外源以及内源的高原鼠兔hif-1α蛋白的表达和定位,为后续的研究提供了重要的实验材料。