海南坡鹿hsf1cdna的克隆与表达

？采用rt-pcr和race方法扩增海南坡鹿热休克转录调节因子1(heatshocktranscriptionfactor1,hsf1)cdna全长,将扩增产物与pmd20-t载体连接,重组质粒经pcr、酶切鉴定后测序并进行生物信息学分析;构建pet28a-hdhsf1表达载体,经iptg诱导表达后,进行sds-page和westernblot分析。结果显示,海南坡鹿hsf1cdna全长为2036bp,含有1个1578bp的开放阅读框,编码525个氨基酸。经生物信息学分析,hsf1是一个等电点为4.93的亲水性蛋白。经iptg诱导表达后,得到一个带组氨酸标签的约62kd的融合蛋白,用抗his单克隆抗体进行westernblot,得到一条约62kd特异性抗体结合带,表明海南坡鹿hsf1原核表达载体成功构建并表达。