狐、貉和水貂犬瘟热病毒受体slam的基因克隆及其真核表达

？信号淋巴激活分子(slam)为犬瘟热病毒(cdv)感染其宿主动物识别的细胞受体。本试验应用rt-pcr从狐狸、貉和水貂的外周血淋巴细胞中克隆到其相应slam基因。基因测序比较发现,狐狸、貉与同科的犬slam基因编码区长度均为1029bp,核苷酸同源性高于98.6%;而水貂slam基因编码区长度为1020bp,与以上三种动物遗传关系较远(核苷酸同源性<83.7%),但与海豹slam基因遗传关系较近(核苷酸同源性为91.4%)。基于不同动物slam基因序列的系统进化树分析显示,犬、狐狸、貉、水貂和海豹在进化树上构成了以cdv为感染宿主的遗传分支。氨基酸序列比较显示,该5种动物slam分子上均存在一个长度为26个氨基酸的信号肽序列,且在空间结构上影响宿主——病毒特异性的8个关键氨基酸均完全保守。通过构建表达该狐狸、貉、水貂slam基因的三种真核表达质粒,分别转染crfk细胞后,应用cdv强毒感染试验证实,cdv均能在三种转染细胞上产生明显的细胞病变效应(cpe),而未转染crfk细胞对照无cpe产生,由此证实作为cdv细胞受体的狐、貉和水貂的slam,体外表达后能明显增强犬瘟热强毒株对非敏感细胞的感染能力。